HLA –DRB、DQB、DPB1、PCR检测试剂盒说明书

（10人份/套）

-20℃保存，一年有效

试剂盒组成

1．5╳buffer          1支             4.Taq酶                  1支

2.dNTPS             1支              5.ddH2O                 1支

3.引物（P1、P2）      1支             6.人DNA阳性对照              1支

标本处理  

DNA提取：可按常规DNA提取方法进行，或参照下述方法进行：肝素抗凝全血100ul加蒸馏水1.0ml混匀，12000rpm离心3分钟，弃上清及红细胞碎片，再加蒸馏水1.0ml混匀，重复一次，离心弃上清液，沉淀加50ul裂解液，混匀后（或再加2ul 10ug/ul蛋白酶K经55℃水浴1小时，次步可省略）置100℃沸水浴8分钟，再15000rpm离心1分钟，取上清液待检。

加样及PCR

ddH2O   补足到终体积30ul

5╳buffer 6ul

dNTPs     3ul

引物P1、P2 3ul

样品DNA    0.1~1ug（阳性对照3ul）

Taq酶 1ul

混匀后稍离心，加石蜡油3滴，DRB、DQB扩增参数为94℃4分钟，然后按94℃50秒，55℃40秒，72℃90秒，循环35次。DPB1扩增参数为94℃60秒，65℃30秒，72℃90秒，循环35次，最后72℃保温4分钟。扩增结束后，可立即电泳或置-20℃保存备用。

结果判断

    HLA –DRB、DQB、DPB1扩增的片段位于第二个外显子，决定各等位基因的多态性。扩增产物可根据需要进行各种分析，如RFLP分析、探针杂交分析、SSCP分析。将胶置于紫外透射分析仪上。其中HLA –DRB扩增片段为280bp；HLA- DQB扩增片段为280bp；HLA- DPB1扩增片段为320bp。

HLA –DRB、DQB及DPB1基因扩增试剂盒简介

人类白细胞抗原（HLA）又称人类主要组织相绒性复合物，是与免疫有关的多等位基因复合体。该类基因与许多种疾病相关，器官移植配型必须HLA型别相同才能减少排斥反应。由于人类基因具有高度多态性，人群中具有完全相同型别者不到百万分之一，故被法医学用着个体识别的标志非常适合，我们根据第十一届国际HLA会议推荐的资料设计成HLA- DRB、DQB及DPB1基因扩增试剂盒，放大该基因决定各型别多态性的第二个外显子，以便用户进一步进行探针（SS0）或限制性内切酶（RFLP）定型分，或在基因DNA水平上进行研究。

注:  该中文说明书仅作参考!

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